Jaka jest najlepsza metoda?
—Testy w diagnostyce zakażenia SARS-CoV-2
W przypadku potwierdzonych przypadków COVID-19 zgłoszone typowe objawy kliniczne obejmują gorączkę, kaszel, bóle mięśni lub zmęczenie.Jednak objawy te nie są unikalnymi cechami COVID-19, ponieważ są one podobne do objawów innych chorób zakażonych wirusem, takich jak grypa.Obecnie głównymi narzędziami do diagnostyki klinicznej infekcji są wirusowe kwasy nukleinowe Real-Time PCR (rt-PCR), obrazowanie CT i niektóre parametry hematologiczne.Wiele zestawów testów laboratoryjnych zostało opracowanych i wykorzystanych do badania próbek pacjentów pod kątem COVID-19 przez chińskie CDC1, amerykański CDC2oraz inne firmy prywatne.Test przeciwciał IgG/IgM, serologiczna metoda testowa, został również dodany jako kryterium diagnostyczne w zaktualizowanej chińskiej wersji wytycznych dotyczących diagnozowania i leczenia nowej choroby koronawirusowej (COVID-19), która została wydana 3 marca1.Test rt-PCR kwasu nukleinowego wirusa nadal jest obecną standardową metodą diagnostyczną w diagnostyce COVID-19.
Silny Krok®Nowatorski zestaw Coronavlrus (SARS-COV-2) Multiplex Real-Time PCR Kit (wykrywanie trzech genów)
Jednak te zestawy testowe PCR w czasie rzeczywistym, poszukujące materiału genetycznego wirusa, na przykład w wymazach z nosa, jamy ustnej lub odbytu, mają wiele ograniczeń:
1) Testy te mają długi czas realizacji i są skomplikowane w działaniu;zazwyczaj uzyskanie wyników zajmuje średnio od 2 do 3 godzin.
2) Testy PCR wymagają do działania certyfikowanych laboratoriów, drogiego sprzętu i przeszkolonych techników.
3) Istnieje pewna liczba wyników fałszywie ujemnych dla rt-PCR COVID-19.Może to być spowodowane niskim mianem wirusa SARS-CoV-2 w próbce wymazu z górnych dróg oddechowych (Nowy koronawirus infekuje głównie dolne drogi oddechowe, takie jak pęcherzyki płucne), a test nie może zidentyfikować osób, które przeszły infekcję, wyzdrowiały i oczyścili wirusa z ich ciał.
Badania przeprowadzone przez Lironga Zou i innych4odkryli, że wyższe miano wirusa wykryto wkrótce po wystąpieniu objawów, przy czym wyższe miano wirusa wykryto w nosie niż w gardle, a wzorzec wydzielania wirusowego kwasu nukleinowego u pacjentów zakażonych SARS-CoV-2 przypomina ten u pacjentów z grypą4i wygląda inaczej niż u pacjentów zakażonych SARS-CoV-2.
Yang Pan i inni5zbadali seryjne próbki (wymazy z gardła, plwociny, moczu i kału) od dwóch pacjentów z Pekinu i odkryli, że miano wirusa w próbkach wymazu z gardła i plwociny osiągnęło szczyt około 5–6 dni po wystąpieniu objawów, próbki plwociny generalnie wykazywały wyższe miano wirusa niż próbki wymazu z gardła.Nie wykryto wirusowego RNA w próbkach moczu ani kału od tych dwóch pacjentów.
Test PCR daje wynik pozytywny tylko wtedy, gdy wirus jest nadal obecny.Testy nie mogą zidentyfikować osób, które przeszły infekcję, wyzdrowiały i usunęły wirusa ze swoich ciał.W rzeczywistości tylko około 30%-50% było pozytywnych dla PCR u pacjentów z klinicznie zdiagnozowanym nowym koronawirusowym zapaleniem płuc.Wielu nowych pacjentów z koronawirusowym zapaleniem płuc nie może zostać zdiagnozowanych z powodu ujemnego wyniku testu kwasu nukleinowego, więc nie mogą oni otrzymać odpowiedniego leczenia na czas.Od pierwszej do szóstej edycji wytycznych, opierając się wyłącznie na diagnozie wyników badań kwasów nukleinowych, co sprawiało ogromne kłopoty klinicystom. Najwcześniejszy „informator”, dr Li Wenliang, okulista z Wuhan Central Szpital nie żyje.W ciągu swojego życia miał trzy testy kwasów nukleinowych w przypadku gorączki i kaszlu, a ostatnim razem uzyskał dodatni wynik PCR.
Po dyskusji ekspertów podjęto decyzję o zwiększeniu metod badania surowicy jako nowego kryterium diagnostycznego.Podczas gdy testy na przeciwciała, zwane również testami serologicznymi, mogą potwierdzić, czy ktoś został zarażony, nawet po tym, jak jego układ odpornościowy oczyścił wirusa wywołującego COVID-19.
Szybki test przeciwciał IgG/IgM StrongStep® SARS-COV-2
Test na przeciwciała IgG/IgM pomoże w znacznie bardziej populacyjnym prześledzeniu, kto miał infekcję, ponieważ wiele przypadków wydaje się rozprzestrzeniać od bezobjawowych pacjentów, których nie można łatwo zidentyfikować.Para z Singapuru, mąż uzyskał pozytywny wynik testu PCR, wynik testu PCR jego żony był negatywny, ale wyniki testu na przeciwciała wykazały, że miała ona przeciwciała, podobnie jak jej mąż.
Testy serologiczne muszą być dokładnie zweryfikowane, aby mieć pewność, że reagują niezawodnie, ale tylko na przeciwciała przeciwko nowemu wirusowi.Jedną z obaw było to, że podobieństwo między wirusami powodującymi zespół ostrej ostrej niewydolności oddechowej a COVID-19 może prowadzić do reaktywności krzyżowej.IgG-IgM opracowany przez Xue Feng wang6uznano, że można go stosować jako test POCT (point-of-care test), ponieważ można go wykonać przy łóżku pacjenta na podstawie krwi z opuszki palca.Zestaw ma czułość 88,66% i swoistość 90,63%.Jednak nadal były wyniki fałszywie dodatnie i fałszywie ujemne.
W zaktualizowanej chińskiej wersji wytycznych dotyczących diagnozy i leczenia nowej choroby koronawirusowej (COVID-19)1, potwierdzone przypadki są definiowane jako podejrzane przypadki, które spełniają jedno z następujących kryteriów:
(1)Próbki dróg oddechowych, próbki krwi lub kału, w których stwierdzono obecność kwasu nukleinowego SARS-CoV-2 przy użyciu rt-PCR;
(2) Genetyczne sekwencjonowanie wirusa z próbek dróg oddechowych, krwi lub kału jest wysoce homologiczne ze znanym SARS-CoV-2;
(3) Przeciwciała IgM i IgG swoiste dla koronawirusa były pozytywne;
(4) Przeciwciało IgG specyficzne dla koronawirusa w surowicy zmieniło się z negatywnego na pozytywne lub przeciwciało IgG specyficzne dla koronawirusa w okresie zdrowienia jest 4 razy wyższe niż w okresie ostrym.
Diagnoza i leczenie COVID-19
| Wytyczne | Opublikowane | Potwierdzone kryteria diagnostyczne |
| Wersja 7. | 3mar.2020 | ❶PCR ❷ NGS ❸ IgM+IgG |
| Wersja 6. | 18 lutego 2020 | ❶PCR ❷ NGS |
Odniesienie
1. Wytyczne dotyczące diagnozowania i leczenia nowego koronawirusowego zapalenia płuc (wersja badania 7, Narodowa Komisja Zdrowia Chińskiej Republiki Ludowej, wydana 3.03.2020)
http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7652m/202003/a31191442e29474b98bfed5579d5af95.shtml
2. Badania Użyj tylko protokołu RT-PCR w czasie rzeczywistym do identyfikacji 2019-nCoV
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html
3. Singapur twierdzi, że po raz pierwszy zastosowano test na przeciwciała do śledzenia infekcji koronawirusem
https://www.sciencemag.org/news/2020/02/singapore-claims-first-use-antibody-test-track-coronavirus-infections
4. SARS-CoV-2 Obciążenie wirusem w próbkach górnych dróg oddechowych zakażonych pacjentów 19 lutego 2020 r. DOI: 10.1056/NEJMc2001737
5. Wirusy SARS-CoV-2 w próbkach klinicznych Lancet Infect Dis 2020 opublikowany 24 lutego 2020 r. (https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30113-4)
6. Opracowanie i zastosowanie kliniczne szybkiego testu przeciwciał IgM-IgG przeciwko SARS-CoV-2
Diagnostyka infekcji XueFeng Wang ORCID iD: 0000-0001-8854-275X
Czas posta: 17 marca-2020
