Jedna walka na świecie
─ Współpraca międzynarodowa w celu zbudowania globalnej społeczności wspólnego przeznaczenia reagującego na wyzwanie pandemiczne Covid-19
Powieść Coronawirus zamiatający cały świat zaowocował trwającym globalnym kryzysem pandemicznym Covid-19. Powieść Coronawirus nie ma granic, żaden kraj nie zostanie oszczędzony z tej walki z Covid-19. W odpowiedzi na tę światową pandemię Covid-19, Liming Bio-Products Corp wnosi wkład w wsparcie dobrostanu naszych globalnych społeczności.
Nasz świat jest obecnie w obliczu bezprecedensowego wpływu nowatorskiej choroby Coronawirus 2019 (COVID-19). Do tej pory nie ma wydajnego leku w leczeniu tej choroby. Jednak opracowano wiele testów diagnostycznych do wykrywania COVID-19. Testy te oparte są na metodach molekularnych lub serologicznych w celu wykrycia nowego specyficznego dla koronawirusa kwasu nukleinowego lub biomarkerów przeciwciał. Ponieważ COVID-19 osiągnął status pandemiczny, wczesna diagnoza nowej infekcji koronawirusa ma kluczowe znaczenie w ocenie rozprzestrzeniania się wirusa i zawieraniu go, ale idealny test na uniwersalne użycie jeszcze nie istnieje. Musimy wiedzieć, jakie testy można potencjalnie wykorzystać do badań przesiewowych, diagnozy i monitorowania zakażenia Covid-19 i jakie są ich ograniczenia. Bardzo ważne jest, jak lepiej korzystać z tych narzędzi naukowych oraz pomóc zidentyfikować i kontrolować pojawienie się tej szybko rozprzestrzeniającej się i poważnej choroby.
Celem wykrywania nowego koronawirusa jest ustalenie, czy osoba, która ma zakażenie Covida-19, czy asymptotyczny nosiciel, który może w milczeniu, aby dostarczyć niezbędne informacje w celu prowadzenia podejmowania decyzji w leczeniu klinicznym. Poprzednie badania wykazały, że 70% decyzji klinicznych zależy od wyników testowania. Gdy stosowane są różne metody wykrywania, wymagania zestawów odczynników wykrywania są również różne.
Rysunek 1
Rysunek 1:Schemat pokazujący kluczowe etapy ogólnych poziomów biomarkerów podczas typowego przebiegu czasowego zakażenia Covid-19. Oś X wskazuje liczbę dni zakażenia, a oś Y wskazuje obciążenie wirusowe, stężenie antygenów i stężenie przeciwciał w różnych okresach. Przeciwciało odnosi się do przeciwciał IgM i IgG. Zarówno RT-PCR, jak i wykrywanie antygenu są wykorzystywane do wykrycia obecności lub braku nowego koronawirusa, co jest bezpośrednim dowodem na wczesne wykrywanie pacjenta. W ciągu tygodnia od infekcji wirusowej preferowane jest wykrywanie PCR lub wykrywanie antygenu. Po nowatorskiej infekcji koronawirusa przez około 7 dni przeciwciało IGM przeciwko nowatorskiemu koronawirusowi stopniowo wzrastało we krwi pacjenta, ale czas trwania istnienia jest krótki, a jego stężenie szybko zmniejsza się. Natomiast przeciwciało IgG przeciwko wirusowi pojawia się później, zwykle około 14 dni po zakażeniu wirusa. Stężenie IgG stopniowo rośnie i utrzymuje długi okres we krwi. Tak więc, jeśli IgM zostanie wykryty we krwi pacjenta, oznacza to, że wirus niedawno zainfekował, który jest markerem wczesnego infekcji. Kiedy przeciwciało IgG jest wykryte we krwi pacjenta, oznacza to, że infekcja wirusowa jest od pewnego czasu. Nazywa się to również późną infekcją lub wcześniejszą infekcją. Często obserwuje się go u pacjentów w fazie odzyskiwania.
Biomarkery nowego koronawirusa
Nowy koronawirus jest wirusem RNA, który składa się z białek i kwasów nukleinowych. Wirus atakuje organizm gospodarza (ludzkiego), wchodzi komórki poprzez miejsce wiązania odpowiadające ACE2 receptora i replikuje się w komórkach gospodarza, powodując, że ludzki układ odpornościowy reaguje na obce najeźdźców i wytwarzają specyficzne przeciwciała. Dlatego fiolowskie kwasy nukleinowe i antygeny oraz specyficzne przeciwciała przeciwko nowatorskiemu koronawirusowi można teoretycznie stosować jako specyficzne biomarkery do wykrywania nowego koronawirusa. Do wykrywania kwasu nukleinowego technologia RT-PCR jest najczęściej stosowana, podczas gdy metody serologiczne są powszechnie stosowane do wykrywania nowych przeciwciał specyficznych dla koronawirusa. Obecnie dostępnych jest wiele metod testowych, które możemy wybrać do testowania zakażenia Covid-19 [1].
Podstawowe zasady głównych metod testowych dla nowego koronawirusa
Do tej pory dostępnych jest wiele testów diagnostycznych dla COVID_19, a więcej zestawów testowych otrzymuje zatwierdzenie w ramach zezwolenia na awaryjne użycie każdego dnia. Chociaż nowe zmiany testowe pojawiające się z tak wieloma różnymi nazwami i formatami, wszystkie obecne testy Covid_19 zasadniczo polegają na dwóch głównych technologiach: wykryciu kwasu nukleinowego dla wirusowych RNA i serologicznych testach immunologicznych, które wykrywają przeciwciała specyficzne dla wirusa (IGM i IGG).
01. Wykrywanie kwasu nukleinowego
Reakcja łańcuchowa odwrotnej transkrypcji-polimerazy (RT-PCR), amplifikacja izotermiczna za pośrednictwem pętli (LAMP) i sekwencjonowanie nowej generacji (NGS) są powszechnymi metodami kwasu nukleinowego do wykrywania nowego RNA koronawirusa. RT-PCR jest pierwszym rodzajem testu dla COVID-19, zalecanego zarówno przez Światową Organizację Zdrowia (WHO), jak i amerykańskie Centrum Kontroli i Zapobiegania Chorobom (CDC).
02. Serologiczne wykrywanie przeciwciał
Przeciwciało jest białkiem ochronnym wytwarzanym w ludzkim ciele w odpowiedzi na infekcję wirusa. IgM jest wczesnym typem przeciwciała, podczas gdy IgG jest przeciwciałem późniejszym. Próbka w surowicy lub osoczu jest zwykle badana pod kątem obecności określonych typów IgM i IgG przeciwciała do oceny faz ostrej i rekonwalescencyjnych zakażenia Covid-19. Te metody wykrywania opartych na przeciwciałach obejmują koloidalny test immunochromatografii złotej, immunochromatografia mikrosfery lateksowej lub fluorescencyjnej, test immunosorbentowy (ELISA) oraz test chemiluminescencyjny.
03. Wiralny wykrywanie antygenu
Antygen jest strukturą wirusa rozpoznawanego przez ludzkie ciało, który wywołuje układ obrony immunologicznej w celu wytworzenia przeciwciał w celu usunięcia wirusa z krwi i tkanek. Antygen wirusowy obecny na wirusie może być ukierunkowany i wykryty za pomocą testu immunologicznego. Podobnie jak wirusowy RNA, wirusowe antygeny są również obecne w przewodzie oddechowym zakażonych osób i mogą być stosowane do diagnozowania ostrej fazy zakażenia COVID-19. Dlatego często zaleca się zbieranie próbek górnych oddechowych, takich jak ślina, wymazy nosowo -gardłowe i gardło, głębokie kaszel, płyn z płukania oskrzelowo -pęcherzykowego (BALF) do wstępnego badania antygenu.
Wybór metod testowania nowego koronawirusa
Wybór metody testowania obejmuje wiele czynników, w tym otoczenie kliniczne, testowanie kontroli jakości, czas zwrotu, koszty testowania, metody pobierania próbkowania, wymagania techniczne personelu laboratoryjnego, wymagania dotyczące obiektu i sprzętu. Wykrywanie kwasów nukleinowych lub antygenów wirusowych polega na przedstawieniu bezpośrednich dowodów na obecność wirusów i potwierdzenie diagnozy nowej infekcji koronawirusa. Chociaż istnieje wiele metod wykrywania antygenu, ich czułość wykrywania nowego koronawirusa jest teoretycznie niższa niż w przypadku amplifikacji RT-PCR. Testowanie przeciwciał jest wykrywanie przeciwciał antywirusowych wytwarzanych w ludzkim ciele, który jest opóźniony w czasie i często nie może być stosowany do wczesnego wykrywania podczas ostrej fazy zakażenia wirusem. Ustawienie kliniczne zastosowań wykrywania może się różnić, a miejsca pobierania próbek mogą być również różne. W przypadku wykrywania wirusowych kwasów nukleinowych i antygenów próbka należy zebrać w dróg oddechowych, w których występuje wirus, taki jak wymazy nosogardzieli, wymazy jamy ustnej gardła, plwocina lub płyn do płukania oskrzelowo -pęcherzykowego (BALF). W celu wykrywania przeciwciał próbki krwi należy zebrać i zbadać pod kątem obecności specyficznego przeciwciała antywirusowego (IgM/IgG). Jednak wyniki testu przeciwciał i kwasu nukleinowego mogą się uzupełniać. Na przykład, gdy wynik testowania jest kwas nukleinowy-ujemny, ujemny IgM, ale dodatni IgG, wyniki te wskazują, że pacjent nie nosi wirusa, ale został odzyskany z nowej infekcji koronawirusa. [2]
Zalety i wady nowych testów koronawirusa
W protokole diagnozy i leczenia nowatorskiego koronawirusa zapalenia pneumonii (wersja próby 7) (wydana przez National Health Commission i State Administration of Tradycyjna medycyna chińska w dniu 3 marca 2020 r.), Testy kwasu nukleinowego są stosowane jako złoto standardowe diagnozę nowatorskiego Zakażenie koronawirusa, podczas gdy testowanie przeciwciał jest również uważane za jedną z metod potwierdzenia diagnozy.
Odkrycia patogenne i serologiczne
(1) Odkrycia patogenne: Nowy kwas nukleinowy koronawirusa można wykryć w wymazach nosowo-gardłowych, plwocinie, wydzielaniach dolnych dróg oddechowych, krwi, kale i innych próbkach za pomocą metod RT-PCRAND/lub NGS. Jest dokładniejszy, jeśli próbki są uzyskiwane z dolnych dróg oddechowych (ekstrakcja plwocina lub powietrza). Próbki należy przesłać do testowania tak szybko, jak to możliwe po pobraniu.
(2) ustalenia serologiczne: IgM specyficzny dla wirusa NCP staje się wykrywalny około 3-5 dni po wystąpieniu; IGG osiąga miareczkowanie co najmniej 4-krotnego wzrostu w okresie rekonwalescencji w porównaniu z fazą ostrą.
Jednak wybór metod testowania zależy od lokalizacji geograficznych, przepisów medycznych i warunków klinicznych. W USA wytyczne dotyczące leczenia Coronawirusa w 2019 r. NIH wydało Coronawirus Chorober (COVID-19) (zaktualizowana strona: 21 kwietnia 2020 r.) I FDA wydała polisę testów diagnostycznych choroby koronawirusa-2019 podczas nagłych wypadków w sprawie zdrowia publicznego (wydane 16 marca 202020 r. ), w których testowanie serologiczne przeciwciał IgM/IgG wybrano tylko jako test badań przesiewowych.
Metoda wykrywania kwasu nukleinowego
RT_PCR jest wysoce wrażliwym testem kwasu nukleinowego zaprojektowanego w celu wykrycia, czy nowy Coronawirus RNA jest obecny w próbce oddechowej lub w innych próbkach. Pozytywny wynik testu PCR oznacza obecność nowego RNA koronawirusa w próbce w celu potwierdzenia zakażenia COVID-19. Wynik testu ujemnego PCR nie oznacza braku zakażenia wirusem, ponieważ może mieć wpływ słabe jakość próbki lub punkt czasowy choroby w odzyskanej fazie itp. Chociaż RT-PCR jest bardzo czułym testem, ma kilka wad. Testy RT-PCR mogą być pracochłonne i czasochłonne, zasadniczo zależne od wysokiej jakości próbki. Może to stanowić wyzwanie, ponieważ ilość wirusowego RNA nie tylko zmienia się ogromnie między różnymi pacjentami, ale może również zmieniać się w ramach tego samego pacjenta w zależności od punktów czasowych, gdy próbka jest gromadzona, a także faz infekcji lub wystąpienia objawów klinicznych. Wykrywanie nowego koronawirusa wymaga wysokiej jakości próbek, które zawierają wystarczającą ilość nienaruszonego wirusowego RNA.
Test RT-PCR może dać nieprawidłowy wynik ujemny (fałszywie ujemny) u niektórych pacjentów z zakażeniem Covid-19. Jak wiemy, główne miejsca infekcji nowego koronawirusa znajdują się w płucach i dolnych dróg oddechowych, takich jak pęcherzyki i oskrzela. Dlatego próbka plwociny z głębokiego kaszlu lub płyn z płukania oskrzelowo -pęcherzykowego (BALF) uważany za najwyższą wrażliwość na wykrywanie wirusa. Jednak w praktyce klinicznej próbki są często gromadzone z górnych dróg oddechowych przy użyciu wymazów nosogardzieli lub gardła. Zbieranie tych okazów jest nie tylko niewygodne dla pacjentów, ale także wymaga specjalnie przeszkolonego personelu. Aby pobierać próbki mniej inwazyjne lub łatwiejsze, w niektórych przypadkach pacjentów mogą otrzymać wymaz doustny i pozwolić im pobrać próbkę z błony śluzowej policzkowej lub wymazującego języka. Bez wystarczającej liczby wirusowych RNA, RT-QPCR może zwrócić wynik testu fałszywie ujemnego. W prowincji Hubei w Chinach wrażliwość RT-PCR w początkowym wykrywaniu zgłoszono tylko około 30–50%, przy średnio 40%. Wysoki wskaźnik fałszywie ujemny był najprawdopodobniej spowodowany niewystarczającym pobieraniem próbek.
Ponadto test RT-PCR wymaga wysoce wyszkolonego personelu do wykonania złożonych etapów ekstrakcji RNA i procedury amplifikacji PCR. Wymaga również wyższego poziomu ochrony biologicznej, specjalnego obiektu laboratoryjnego i instrumentu PCR w czasie rzeczywistym. W Chinach test RT-PCR dla wykrywania COVID-19 należy przeprowadzić w laboratoriach biosa 2 na poziomie 2 (BSL-2), z ochroną personelu przy użyciu praktyki na poziomie 3 (BSL-3). Zgodnie z tymi wymaganiami, od początku stycznia do początku lutego 2020 r., Wydajność Chin Wuhan's CDC Laboratory była w stanie wykryć tylko kilkaset przypadków dziennie. Zwykle nie byłoby to problemem podczas testowania innych chorób zakaźnych. Jednak w przypadku globalnej pandemii, takiej jak Covid-19, z potencjalnie milionami ludzi do przetestowania, RT-PCR staje się krytycznym problemem ze względu na swoje wymagania dotyczące specjalnych obiektów laboratoryjnych lub sprzętu technicznego. Wady te mogą ograniczyć RT-PCR do wykorzystania jako skuteczne narzędzie do badań przesiewowych, a także mogą prowadzić do opóźnień w raportach o wynikach testowych.
Metoda wykrywania przeciwciał serologicznych
Wraz z postępem przebiegu choroby, szczególnie w środkowym i późnym stadium, wskaźnik wykrywania przeciwciał jest bardzo wysoki. Badanie w Wuhan Central South Hospital wykazało, że wskaźnik wykrywania przeciwciał może osiągnąć ponad 90% w trzecim tygodniu zakażenia Covid-19. Również przeciwciało jest wynikiem ludzkiej odpowiedzi immunologicznej przeciwko nowatorskiemu koronawirusowi. Test przeciwciał oferuje kilka zalet w stosunku do RT-PCR. Po pierwsze, serologiczne przeciwciało testuje proste i szybkie. Testy przepływu bocznego przeciwciała mogą być wykorzystane w punkcie opieki, aby zapewnić wynik za 15 minut. Po drugie, celem wykrytym w teście serologicznym jest przeciwciało, o których wiadomo, że jest znacznie bardziej stabilny niż wirusowy RNA. Podczas zbierania, transportu, przechowywania i testowania próbki do testów przeciwciał są ogólnie bardziej stabilne niż próbki dla RT-PCR. Po trzecie, ponieważ przeciwciało jest równomiernie rozłożone w krążeniu krwi, istnieje mniejsza zmiana próbkowania w porównaniu z testem kwasu nukleinowego. Objętość próbki wymagana do testu przeciwciał jest stosunkowo niewielka. Na przykład 10 mikrolitr krwi palców prętów jest wystarczające do zastosowania w teście przepływu bocznego przeciwciała.
Zasadniczo test przeciwciał jest wybierany jako narzędzie suplementów do wykrywania kwasu nukleinowego w celu poprawy szybkości wykrywania nowego koronawirusa podczas kursów choroby. Gdy test przeciwciał jest stosowany razem z testem kwasu nukleinowego, może zwiększyć dokładność testu dla diagnozy COVID19 poprzez zmniejszenie potencjalnych wyników fałszywie dodatnich i fałszywie ujemnych. Obecny przewodnik operacyjny nie zaleca użycia dwóch rodzajów testu osobno jako niezależnego formatu wykrywania, ale powinien być używany jako format połączony. [2]
Rysunek 2:Prawidłowa interpretacja wyników testu kwasu nukleinowego i przeciwciał do wykrywania nowej infekcji koronawirusowej
Rysunek 3:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Nowatorski zestaw przeciwciał Coronawirus IgM/IgG Dual Rapid Test (Strongstep®Test szybkiego testu przeciwciał IgM/IgG SARS-COV-2, immunochromatografia)
Rysunek 4:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Strongstep®Nowy zestaw koronawirusa (SARS-COV-2) Multipleks PCR w czasie rzeczywistym (wykrywanie trzech genów, metoda sondy fluorescencyjnej).
Notatka:Ten bardzo wrażliwy, gotowy do użycia zestaw PCR jest dostępny w formacie liofilizowanym (proces liofilizacji) do długoterminowego przechowywania. Zestaw można transportować i przechowywać w temperaturze pokojowej i jest stabilny przez jeden rok. Każda rurka premiksów zawiera wszystkie odczynniki potrzebne do amplifikacji PCR, w tym odwrotna transryptaza, polimeraza Taq, startery, sondy i substraty DNTPS.Users mogą po prostu odtworzyć mieszankę, dodając wodę klasy PCR wraz z szablonem, a następnie załadować na instrument PCR, aby uruchomić wzmocnienie.
W odpowiedzi na nowy wybuch Coronawirusa Liming Bio-Products Co., Ltd. szybko pracował nad opracowaniem dwóch zestawów diagnostycznych, aby umożliwić laboratoria kliniczne i zdrowia publicznego w celu szybkiego zdiagnozowania zakażenia COVID-19. Zestawy te są bardzo odpowiednie do stosowania do badań przesiewowych na dużą skalę w krajach i regionach, w których nowy wybuch koronawirusa szybko się rozprzestrzenia, a także do diagnozowania i potwierdzenia zakażenia Covid-19. Zestawy te służą wyłącznie w ramach wstępnie notowanego autoryzacji użytkowania awaryjnego (PEUA). Testy są ograniczone do laboratoriów certyfikowanych zgodnie z przepisami władz krajowych lub lokalnych.
Metoda wykrywania antygenu
1. Wykrywanie wirusowego antygenu jest klasyfikowane w tej samej kategorii bezpośredniego wykrywania, co wykrywanie kwasu nukleinowego. Te bezpośrednie metody wykrywania szukają dowodów patogenów wirusowych w próbce i mogą być stosowane do diagnozy potwierdzającej. Jednak opracowanie zestawów wykrywania antygenu wymaga wysokiej jakości przeciwciał monoklonalnych o silnym powinowactwie i wysokiej czułości zdolnej do rozpoznawania i wychwytywania patogennych wirusów. Wybór i optymalizacja przeciwciała monoklonalnego odpowiadające jest zwykle ponad sześć miesięcy, odpowiednio do zastosowania w przygotowaniu zestawu wykrywania antygenu.
2. Obecnie odczynniki do bezpośredniego wykrywania nowego koronawirusa są nadal w etapie badań i rozwoju. Dlatego żaden zestaw wykrywania antygenu nie został zatwierdzony klinicznie i dostępny w handlu. Chociaż wcześniej doniesiono, że firma diagnostyczna w Shenzhen opracowała zestaw wykrywania antygenu i testowany klinicznie w Hiszpanii, niezawodność i dokładność testu nie mogły zostać zatwierdzone ze względu na obecność problemów z jakością odczynnika. Do tej pory NMPA (były China FDA) nie zatwierdziła jeszcze żadnego zestawu do wykrywania antygenów do użytku klinicznego. Podsumowując, opracowano różne metody wykrywania. Każda metoda ma swoje zalety i ograniczenia. Wyniki różnych metod można wykorzystać do weryfikacji i uzupełnienia.
3. Produkowanie wysokiej jakości zestawu testowego COVID-19 silnie zależy od optymalizacji podczas badań i rozwoju. Liming Bio-Product Co., Ltd. Zestawy testowe są zobowiązane do spełnienia rygorystycznych standardów produkcji i kontroli jakości, aby zapewnić najwyższy poziom wydajności i spójności. Naukowcy z Liming Bio-Product Co., Ltd. mają ponad dwadzieścia lat doświadczenia w projektowaniu, testowaniu i optymalizacji zestawów diagnostycznych in vitro, aby zapewnić najwyższy poziom wydajności w kwantyfikacji analitycznej.
Podczas pandemii Covid-19 rząd chiński stanął przed wzrostem ogromnego zapotrzebowania na materiały zapobiegające epidemii w międzynarodowych hotspotach. 5 kwietnia na konferencji prasowej Rady Stanowej Wspólny mechanizm zapobiegania i kontroli „Wzmocnienie zarządzania jakością materiałów medycznych i regulacja kolejności rynku”, Jiang Fan, inspektor pierwszego poziomu Departamentu Handlu Zagranicznego Ministerstwa Handlu, powiedział: „Następnie skupimy nasze wysiłki na dwóch aspektach, najpierw, aby przyspieszyć wsparcie większej liczby materiałów medycznych potrzebnych społeczności międzynarodowej, a także w celu poprawy kontroli jakości, regulacji i zarządzania produktami. Wkład Chin do wspólnie reagowania na globalną epidemię i budowanie społeczności ze wspólną przyszłością dla ludzkości.
Rysunek 5:Liming Bio-Products Co., Nowator Coronawirus Ltd. uzyskał certyfikat rejestracji UE
Certyfikat honorowy
Houshenshan
Rycina 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. wspierał szpital górski Wuhan Vulcan (Houshenshan) w celu walki z epidemią Covid-19 i otrzymał certyfikat honorowy Wuhan Red Cross. Wuhan Vulcan Mountain Hospital to najsłynniejszy szpital w Chinach, który specjalizuje się w leczeniu ciężkiego Covid - 19 pacjentów.
Gdy powieść Coronavirus coraz bardziej rozprzestrzenia się na całym świecie, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. podejmuje się wspierania i pomagania społecznościom na całym świecie dzięki naszym innowacyjnym technologiom w walce z tym bezprecedensowym globalnym zagrożeniem. Szybkie testowanie zakażenia Covid-19 jest kluczową częścią rozwiązania tego zagrożenia. Nadal w znacznym stopniu przyczyniamy się, zapewniając wysokiej jakości platformy diagnostyczne w ręce pracowników opieki zdrowotnej z pierwszej linii, aby ludzie mogli otrzymać potrzebne wyniki testów krytycznych. Liming Bio-Products Co., Ltd., w walce z pandemią Covid-19 mają na celu przyczynienie naszych technologii, doświadczeń i wiedzy specjalistycznej dla międzynarodowych społeczności na budowę globalnej społeczności przeznaczenia.
Długa prasa ~ zeskanuj i podążaj za nami
E-mail: sales@limingbio.com
Strona internetowa: https://limingbio.com
Czas po: 01-2020 maja
