Nowy zestaw do PCR z koronawirusem (SARS-CoV-2) Multiplex Real-Time PCR
Ten bardzo czuły, gotowy do użycia zestaw do PCR jest dostępny w postaci liofilizowanej (proces liofilizacji) do długotrwałego przechowywania.Zestaw można transportować i przechowywać w temperaturze pokojowej i jest stabilny przez rok.Każda probówka premiksu zawiera wszystkie odczynniki potrzebne do amplifikacji PCR, w tym odwrotną transkryptazę, polimerazę Taq, startery, sondy i substraty dNTPs.Wystarczy dodać 13 μl wody destylowanej i 5 μl wyekstrahowanej matrycy RNA, a następnie można ją przeprowadzić i amplifikować na instrumentach PCR.
Maszyna qPCR powinna spełniać następujące wymagania:
1. Dopasuj 8-paskową probówkę do PCR o objętości 0,2 ml
2. Mieć więcej niż cztery kanały wykrywania:
Kanał | Wzbudzenie (nm) | Emisja (nm) | Wstępnie skalibrowane barwniki |
1. | 470 | 525 | FAM, SYBR Zielony I |
2 | 523 | 564 | VIC, HEX, TET, JOE |
3. | 571 | 621 | ROX, TEKS-CZERWONY |
4 | 630 | 670 | CY5 |
Platformy PCR:
7500Real-Time PCR System, Biorad CF96, iCycler iQ™ Real-Time PCR System wykrywania, Stratagene Mx3000P, Mx3005P
Trudność transportu zimnego łańcucha odczynnika do wykrywania kwasu nukleinowego nowego koronawirusa
Gdy konwencjonalne odczynniki do wykrywania kwasów nukleinowych są transportowane na duże odległości, wymagane jest przechowywanie i transport w (-20±5) ℃ w łańcuchu chłodniczym, aby zapewnić, że bioaktywność enzymu w odczynnikach pozostanie aktywna.Aby mieć pewność, że temperatura osiągnie standard, potrzeba kilku kilogramów suchego lodu na każde pudełko odczynnika do oznaczania kwasów nukleinowych nawet mniej niż 50g, ale może to wystarczyć tylko na dwa lub trzy dni.Z perspektywy praktyki branżowej rzeczywista waga odczynników wydawanych przez producentów wynosi mniej niż 10% (lub znacznie mniej niż ta wartość) pojemnika.Większość masy pochodzi z suchego lodu, okładów z lodem i pudełek piankowych, więc koszt transportu jest bardzo wysoki.
W marcu 2020 r. COVID-19 zaczął wybuchać na dużą skalę za granicą, a zapotrzebowanie na nowy odczynnik do wykrywania kwasu nukleinowego koronawirusa gwałtownie wzrosło.Pomimo wysokich kosztów eksportu odczynników w łańcuchu chłodniczym, większość producentów nadal może to zaakceptować ze względu na dużą ilość i wysoki zysk.
Jednak wraz z poprawą krajowej polityki eksportowej produktów przeciwpandemicznych, a także podniesieniem krajowej kontroli nad przepływem osób i logistyką, następuje wydłużenie i niepewność w czasie transportu odczynników, co spowodowało znaczące problemy z produktami przez transport.Wydłużony czas transportu (czas transportu około pół miesiąca jest bardzo powszechny) prowadzi do częstych awarii produktu, gdy produkt dociera do klienta.To niepokoiło większość przedsiębiorstw eksportujących odczynniki kwasów nukleinowych.
Liofilizowana technologia odczynnika PCR pomogła w transporcie nowego odczynnika do wykrywania kwasów nukleinowych koronawirusa na całym świecie
Liofilizowane odczynniki PCR można transportować i przechowywać w temperaturze pokojowej, co może nie tylko obniżyć koszty transportu, ale także uniknąć problemów z jakością spowodowanych procesem transportu.Dlatego liofilizacja odczynnika jest najlepszym sposobem rozwiązania problemu transportu eksportowego.
Liofilizacja polega na zamrożeniu roztworu do stanu stałego, a następnie sublimacji i oddzieleniu pary wodnej w warunkach próżni.Wysuszona substancja rozpuszczona pozostaje w pojemniku o tym samym składzie i aktywności.W porównaniu z konwencjonalnymi odczynnikami płynnymi, pełnoskładnikowy liofilizowany odczynnik do wykrywania kwasów nukleinowych Novel Coronavirus produkowany przez Liming Bio ma następujące właściwości:
Niezwykle silna stabilność termiczna:może z obróbką na stojaku w temperaturze 56 ℃ przez 60 dni, a morfologia i działanie odczynnika pozostają niezmienione.
Przechowywanie i transport w normalnej temperaturze:nie ma potrzeby stosowania łańcucha chłodniczego, nie ma potrzeby przechowywania w niskiej temperaturze przed rozszczelnieniem, całkowicie uwolnij przestrzeń chłodni.
Gotowy do użycia:liofilizacja wszystkich składników, brak konieczności konfiguracji systemu, unikanie utraty składników o dużej lepkości, takich jak enzym.
Tarcze multipleksowe w jednej tubie:cel wykrywania obejmuje nowy gen ORF1ab koronawirusa, gen N, gen S, aby uniknąć genowariacji wirusa.W celu zmniejszenia liczby wyników fałszywie ujemnych, ludzki gen RNazy P jest używany jako kontrola wewnętrzna, aby spełnić kliniczną potrzebę kontroli jakości próbki.